Nadaljevanje teme izbire mikroskopa [Mikroskop]
Odločil sem se, da bom z marsikdaj delil našo korespondenco o uporabi mikroskopa v varjenju. Hkrati pa lahko dodamo nova vprašanja in odgovore na to temo.
1. Ali opazujete kvas z brizganjem vode? ali pa samo kapljico pivine?
Ni potrebno posaditi le kapljice pivine, toda preden mešamo mešanico, ne bo nobenega nasičenega kvasa.
2. Pokrijte s pokrivnim steklom? Ali tako padec, da razmisli?
Pogledam na kvas na kamero Goryaev (to je takšno steklo z zarezami v obliki rešetk), njegova uporaba nam omogoča, da preštejemo kvas, lahko pa uporabite preprosto stekleno stekelce, vendar na to ne morete računati. Samo pokrijte, ni treba pritisniti. Pazi čez pet minut. Pred setom pivine v pipeti iztisnite plin iz pivine na mešalnik, sicer bodo mehurčki motili videz.
3. Morate odtenek? Če je tako, kakšna barva?
Gledam, kaj si želite videti, vendar mislim, da ga ne potrebujete, ne slikam ga
4. Kaj je povečanje za uporabo? Imam 4x, 10x, 20x, 40x
20x, 40x. Upoštevajte, da se mora množica leče pomnožiti z množico okularja in to bo povečanje.
5. Ali nadzorujete bakterijsko mikrofloro v fazi aplikacije kvasa in pri polnjenju s sodom? Ali pa iščete kakšne druge faze?
Če je to generacija, potem pred jemanjem kvasa iz cct, zjutraj po setvi, dan po mešanju, pred polnjenjem.
6. Ali je bakterijska mikroflora vidna tudi brez barvila in z enako povečavo? Kaj iščemo: posamezne celice, kolonije itd.?
Vidim ICD in UKB, preprosto nisem naletel na druge, UKB je videl samo v nekem drugem pivu, Bog se je usmilil. Brez barvanja je vse vidno. Barva predvsem, da bi živeli od ne živega, da bi jo ločili. ICD je tanka palica, ki je običajno 1-3 kratna premera celice kvasa. Ko je okužena, ki že veliko pokvari pivo, celo več kot kvas. Pšenica in ale pogosto vodita v kislo snov, redkejši pa so toplotno ljubeč. Če vidim vsaj eno od njih na različnih vidnih poljih iz takšne generacije generacije, ne pijem piva, pivo pustite na tiste točke, kjer bo shranjena na hladnem. UCB se lahko veže, vendar je to že jasna stopnja brez mikroskopa. (((
7. V končnem pivu lahko ocenite kontaminacijo?
Seveda!
Za mnoge domače pivovarje je najnovejši pripomoček za pivovarstvo mikroskop. Kaj bi lahko bilo še bolj neprijetno kot pogledati organizme, ki proizvajajo naše pivo. Ta del članka bo podal priporočila zainteresiranim domačim pivovarjem o nakupu mikroskopa in potrebnih pripomočkov. V drugem delu članka pa bomo pokazali, kako učinkovito uporabljati mikroskop.
Preden začnemo, si poglejmo, kaj je treba pričakovati in kaj ne iz uporabe mikroskopa.
Glavna uporaba mikroskopa na pivovarni je štetje kvasnih celic z uporabo hemocitometra (opomba: Ruski pivovarji običajno v ta namen uporabljajo komoro Goryaev). Število celic je koristno poznati za določitev količine sejanja, preostale koncentracije celic v pivu med polnjenjem in za določitev koncentracije kvasa v sedimentih kvasovk. Slednje je uporabno za vzpostavitev povezave med maso suspenzije sedimenta in količino kvasa, da se zagotovi natančnejša setev brez opravljanja dolgih celic.
Pri štetju kvasa je potreben čas in zlahka dodamo 20-30 minut na vaš kuhalni dan. Še posebej, če želite določiti količino kvasa, ki je na voljo pred setvijo v serijo pivine. Zato je bolj praktično sesati kvas po teži, če lahko koncentracijo kvasovk predvidimo precej natančno.
S preprosto tehnologijo barvanja (metilen modro) lahko ocenite zdravje kulture kvasovk.
Mikroskop omogoča tudi boljšo klasifikacijo vira motnosti. Zlasti vam omogoča, da ugotovite, ali so usedline povzročene s celicami kvasovk ali veliko manjšimi beljakovinskimi globulini.
Z mikroskopom ne morete zanesljivo zaznati okužbe, preden jo opazite v pivu. To je posledica dejstva, da je koncentracija bakterij, ki je potrebna za vplivanje na okusne lastnosti, zelo nizka, in le po naključju lahko opazite bakterije v testnem vzorcu kvasa ali piva. Za to nalogo je bolj primerna uporaba agarja s selektivnim gojiščem.
Najtežja naloga pri pridobivanju mikroskopa je odločitev, kaj točno potrebujete. Cene se gibljejo od 20 $ za otroške igrače do laboratorijske opreme v tisočih in več deset tisoč dolarjih.
Za pivovarsko uporabo iščemo sestavljen (več objektivov) svetlobni mikroskop z naslednjimi funkcijami:
Mikroskop ni edina potrebna oprema za kuhanje. Spodaj je seznam dodatnih izdelkov:
Po klasifikaciji so kvasovke mikroskopske glive kraljestva Mycota. So enocelični fiksni mikroorganizmi majhnosti - 10-15 mikronov. Kljub zunanji podobnosti kvasovk z velikimi vrstami bakterij pripisujejo glivam zaradi svoje ultrastrukture celic in metod razmnoževanja.
Sl. 1. Vrsta kvasa na petrijevki.
Pogosto v naravnih pogojih najdemo kvasovke na substratih, bogatih z ogljikovimi hidrati in sladkorji. Zato so na površini sadja in listov, jagodičevja in sadja na površini rane, v nektarju cvetja, v mrtvi rastlinski masi. Poleg tega se nahajajo v tleh (kot primer, v leglu), vodi. Kvasni organizmi rodu Candida ali Pichia so pogosto zaznani v črevesnem okolju ljudi in številnih živalskih vrst.
Sl. 2. Habitat kvasa.
Vse celice kvasovk vsebujejo približno 75% vode, 50-60% vsebujejo vezano intracelularno in preostalih 10-30% se sprošča. V suhi snovi celice, odvisno od starosti in stanja, povprečno vsebuje:
Poleg tega celice vključujejo številne pomembne sestavine, potrebne za njihov metabolizem - encime, vitamine. Encimi kvasnih organizmov so katalizatorji za različne vrste fermentacijskih in dihalnih procesov.
Sl. 3. Celice kvasnih organizmov.
Kvasne celice imajo drugačno obliko: elipse, ovali, palice, kroglice. Razsežnost je tudi drugačna: pogosto je dolžina 6-12 mikronov, širina pa je 2-8 mikronov. To je odvisno od njihovih habitatov ali pogojev gojenja, prehranskih komponent in okoljskih dejavnikov. Mlade kvasovke so najbolj stabilne lastnosti, zato se lastnosti in opis vrste izvajajo v skladu z njimi.
Kvasni organizmi imajo vse standardne sestavine, ki so del eukariotskih celic. Vendar pa imajo poleg tega edinstvene lastnosti gliv in združujejo znake celičnih struktur rastlin in živali:
Sl. 4. Različne vrste kvasovk: 1 - pekarne (Saccharomyces cerevisiae); 2 - mechnikovia najlepša (Metschnikowia pulcherrima); 3 - kandida (zemlje Candida humicola); 4 - Rhodotorula gluey (Rhodotorula glutinis); 5 - Rhodorotula rdeča (R. rubra); 6 - rhodorotula zlata (R. aurantiaca); 7 - Debaryomyces Cantarelli (Debaryomyces cantarelli); 8 - Cryptococcus laurel (Cryptococcus laurentii); 9 - nedonošena podolgovata (Nadsonia elongata); 10 - rožnati sporobolomici (Sporobolomyces roseus); 11 - sporesomes holsatikus (S. holsaticus); 12 - rhosporidium diobovatum (Rhodosporidium diobovatum).
Celice vsebujejo membrane, citoplazmo in organoide, kot so:
Nekatere vrste so sestavljene iz pigmentov. Pri mladih kvasih je citoplazma homogena. V procesu rasti se v njih pojavljajo vakuole (ki vsebujejo organske in mineralne sestavine). V procesu rasti opazimo nastanek zrnatosti, pride do povečanja vakuolov.
Praviloma lupine vključujejo več plasti z vključenimi polisaharidi, maščobami in komponentami, ki vsebujejo dušik. Nekatere vrste imajo sluznico, zato so celice pogosto zlepljene in oblikujejo se v tekočinah.
Sl. 5. Celična struktura kvasnih organizmov.
Pri respiratornih procesih je treba za kvasne celice potrebovati kisik, vendar mnoge njihove vrste (neobvezno anaerobne) lahko brez njega začasno preživijo in prejmejo energijo iz fermentacijskih procesov (dihanje brez kisika) in tako tvorijo alkohole. To je ena od njihovih glavnih razlik od bakterij:
med kvasom ni predstavnikov, ki bi lahko živeli popolnoma brez kisika.
Dihalni procesi s kisikom so energetsko bolj koristni za kvas, zato, ko se pojavi, celice dokončajo fermentacijo in preklopijo na dihanje kisika, pri čemer sproščajo ogljikov dioksid, ki prispeva k hitrejši rasti celic. Ta učinek se imenuje Pasteur. Včasih, z visoko vsebnostjo glukoze, opazimo Krebtreejev učinek, ko tudi če je kisik, ga kvasne celice fermentirajo.
Sl. 6. Dih kvasnih organizmov.
Mnogi kvasovki so kemoterično-heterotrofni in za pridobivanje energije za prehrano in energijo uporabljajo organska hranila.
V anoksičnih pogojih imajo kvasovke raje ogljikove hidrate, kot so heksoze in oligosaharidi, ki jih sintetizirajo iz prehrane. Nekatere vrste lahko asimilirajo tudi druge vrste ogljikovih hidratov - pentozo, škrob, inulin. Z dostopom kisika so sposobni zaužiti širšo paleto snovi, vključno z maščobo, ogljikovodiki, alkoholom in drugimi snovmi. Takšne kompleksne vrste ogljikovih hidratov, kot so npr. Lignini in celuloze, niso na voljo za njihovo absorpcijo. Viri dušika zanje so praviloma amonijeve soli in nitrati.
Sl. 7. Kvas pod mikroskopom.
Najpogosteje, med metabolizmom, kvasovke proizvajajo različne vrste alkoholov - večinoma so etil, propil, izoamil, butil, izobutil vrste. Poleg tega je na primer tvorba hlapnih maščobnih kislin pokazala sintezo ocetne, propionske, maslene, izobutirne kisline, izovalerne kisline. Poleg tega lahko v življenjski dejavnosti v majhnih koncentracijah v okolje sproščajo številne snovi - fuzelna olja, acetoine, diacetile, aldehide, dimetil sulfid in druge. Organoleptične lastnosti proizvodov, pridobljenih z njihovo uporabo, so pogosto povezane s takšnimi metaboliti.
Posebnost kvasnih celic je njihova sposobnost razmnoževanja vegetativno v primerjavi z drugimi glivicami, ki izvirajo iz bodočih spore ali na primer iz celičnih zigotov (kot so rodovi Candida ali Pichia). Del kvasa lahko uresniči procese spolnega razmnoževanja, ki vsebujejo micelijske faze, ko opazimo nastajanje zigote in njeno nadaljnjo transformacijo v "vrečko" s spori. Nekatere kvasovke, ki tvorijo micelij (npr. Rodovi Endomyces ali Galactomyces), se lahko razgradijo v posamezne celice - artrospore.
Sl. 8. Razmnoževanje kvasa.
Procesi rasti organizmov kvasa so odvisni od različnih okoljskih dejavnikov - temperature, vlažnosti, kislosti, osmotskega tlaka. Večina kvasovk daje prednost srednjim temperaturam, med njimi praktično ni nobenih ekstremofilnih vrst, ki imajo raje previsoko ali pa ravno nizko temperaturo. Znano je, da obstajajo vrste, ki so sposobne trajnih neugodnih okoljskih razmer. Zatirati rast in razvoj nekaterih organizmov kvasa z uporabo antibiotikov.
Sl. 9. Proizvodnja kvasa.
Pogosto se kvas uporablja v gospodinjstvu ali industriji. Človek se že dolgo uporablja za preživetje, na primer pri pripravi kruha in pijač. Danes se njihove biološke sposobnosti uporabljajo pri sintezi uporabnih snovi - polisaharidov, encimov, vitaminov, organskih kislin, karotenoidov.
Sl. 10. Vino je proizvod, ki izvira iz dejavnosti kvasa.
Kvas se uporablja v biotehnoloških procesih pri proizvodnji zdravilnih učinkovin - insulina, interferona, heterolognih proteinov. Zdravniki pogosto predpisujejo pivski kvas oslabljenim ljudem z alergijskimi boleznimi. Uporabite jih in za kozmetične namene za krepitev las, nohtov, izboljšanje stanja kože.
Sl. 11. Kvas v kozmetologiji.
Poleg tega med kvasovkami obstajajo vrste (na primer Saccharomycesboulardii), ki lahko podpirajo in obnavljajo mikrofloro prebavnega trakta ter lajšajo simptome in tveganje za drisko ter zmanjšujejo krčenje mišic pri bolnikih z sindromom razdražljivega črevesja.
Znano je, da lahko razmnoževanje kvasa v hrani povzroči njihovo kvarjenje (npr. Nabrekanje, spremembe v vonjih in okusih). Poleg tega, po mnenju mikologov, med njimi so patogeni, ki lahko povzročijo različne motnje živih organizmov, kot tudi številne hude bolezni ljudi, ki so oslabljeno imuniteto.
Med človeškimi boleznimi se na primer razlikujejo kandidiaza, ki jo povzroča kvasovka Candida in kriptokokoza, katere povzročitelj je Cryptococcusneoformans. Dokazano je, da so te patogene vrste kvasovk pogosto normalni prebivalci človeške mikroflore in se aktivno berejo, da se natančno razmnožujejo, ko so oslabljene, ko prejmejo različne poškodbe, ko pride do opeklin, po kirurških posegih, z dolgoročnimi antibiotiki, včasih v majhnih ali, nasprotno, starejših.
http://microbak.ru/obshhaya-xarakteristika-mikrobov/gribi/drozhzhi.html"Oblikovanje lekcije v 9. razredu v pogojih izvajanja GEF na temo" Študija celic kvasovk pod mikroskopom "
Avtorica učiteljice biologije GBOU Ruska gimnazija v Centralnem muzeju okrožja
"Študija celic kvasovk pod mikroskopom."
Metodična priporočila Študija strukture kvasovk lahko poteka tako v laboratoriju kot v praksi. Proučevanje te teme poteka po tem, ko se otroci seznanijo s splošnimi značilnostmi gob in s strukturo klobasastih gob, zato je pri opravljanju laboratorijskih vaj mogoče na podlagi raziskav pripeljati študente do zaključka o podobnostih in razlikah v strukturi klobasastih gob, plesni in kvasa. Če je to delo praktično, potem je na podlagi izkušenj mogoče potrditi teoretično znanje o splošnih značilnostih gliv in njihovi raznolikosti. Glavne pedagoške tehnike bodo raziskave (vodenje izkušenj) in primerjalno analitično delo (izpolnjevanje tabele, risbe predmetov, ki se proučujejo). Študenti delajo individualno (analizirajo besedila, izdelujejo in pregledujejo priprave, risajo, izpolnijo tabelo), v parih ali majhnih skupinah (odvisno od števila mikroskopov), kot tudi frontalno pri postavljanju vprašanj in razpravljanju o njihovem znanju.
Cilj: Raziskava strukture in razmnoževanja celic kvasovk.
Oprema: mikroskop, steklo in pokrov, epruveta z vodo, kvas, pipeta, prtiček, enostaven svinčnik, zvezek.
Izroček: kartice z navodili, risanje celic kvasovk, besedila, tabele.
Priprava na delo Učitelj lahko sam pripravi vse, kar potrebuje, bodisi da ustvari skupino laboratorijskih pomočnikov iz najbolj aktivnih otrok ali da da učencem v prejšnji lekciji nalogo.
Lahko pripravite izročke v obliki risb s podobo gob, lahko uporabite risbe v učbeniku ali, če omara oprema omogoča, pripravite risbe in fotomikrografije za prikaz na zaslonu.
Priprava naravnih predmetov pred lekcijo: Za pridobitev kulture kvasa v posodi s prostornino 100-200 ml nalijte mleko, segreto na 40-50 stopinj, dodajte košček sladkorja in približno 10 g kvasa, vse premešajte in postavite za 15 minut na toplo mesto.
Začetek lekcije. (igra "Black Box")
V tej črni škatli je predmet, ki ga lahko kupite v trgovini. Prodajo se v obliki prahu in briketov. Ta živi objekt je verjetno eden najstarejših "domačih organizmov". Habitati tega objekta so večinoma povezani s substrati, bogatimi s sladkorjem: površino sadja in listov, kjer se hranijo z rastlinskimi izločki, nektarji cvetja, vendar so tudi pogosti v tleh (zlasti leglo) in naravnih vodah. In vaše babice in matere dodajo ta predmet v testo, ko vam pečejo okusne torte ali kruh. Kaj je v tej črni škatli?
Kartice z besedilom.
Ni vsakdo ve, da so pakiranja kvasa, ki se prodajajo v trgovinah, stisnjeni živi organizmi. Kvas so gobe, vendar so gobe nenavadne. Za razliko od muhara in syrmezheka, ne tvorijo posebnega vegetativnega telesa micelija in obstajajo v eni celični obliki.
Obstaja okoli 1500 vrst kvasovk.
Kvas je verjetno eden najstarejših "domačih organizmov". Tisoče let so jih ljudje uporabljali za peko. Predpostavlja se, da so Egipčani začeli kuhati pivo 6000 let pred našim štetjem. er in do leta 1200 pr. er so obvladali tehnologijo peke kvasnega kruha.
Kvas je bil prvi, ki je leta 1680 v mikroskopu videl nizozemsko naravoslovec Antonia van Leeuwenhoek, vendar ni razumel, da so pred njim živi organizmi (zaradi pomanjkanja gibanja v njih).
Kvasni habitati so večinoma povezani s substrati, bogatimi s sladkorjem: površino plodov in listov, kjer se hranijo z rastlinskimi izločki, nektarjem cvetja, vendar so pogosti tudi v tleh (zlasti leglo) in naravnih vodah.
Leta 1857 je francoski mikrobiolog Louis Pasteur dokazal, da alkoholna fermentacija ni le kemijska reakcija, ampak biološki proces, ki ga proizvaja kvas.
Najbolj značilna vrsta vegetativnega razmnoževanja za kvas je poraščenost.
http://pandia.ru/text/80/374/82553.phpMikrobi in modernost
Danes je brez dvoma vsak domači pivovalec slišal nekaj o najmanjših živih bitjih - kvasu in bakterijah. Mnogi verjetno celo vedo, da so kvasovke prijatelji in pomočniki pivovarn, bakterije pa so najpogosteje nasprotniki in sovražniki. Za prvo je treba skrbeti na vsak način in ustvariti najbolj idealne pogoje za življenje in delo. Drugi morajo poskusiti, da ne dovolijo piva in jih z vsemi sredstvi uničijo. Sodobni pivovarji vedo veliko več o kvasovkah, načinih njihovega gojenja in načinih za njihovo nego, kot pa o mikrobih.
Sodobni ljudje (in celo napredni del človeštva - domači pivovarji) danes nimajo veliko zanimanja za bakterije. Ta beseda je že dolgo poznana in povsem zanimiva. Še več, zdaj so zanimivejše stvari - računalniki, internet, Ferrarijev avto in še veliko več. Tudi sama znanost o mikrobiologiji je šla tako daleč v globine žive snovi, ki nas danes prestraši, pretrese in preseneča, ne z bakterijami, ampak v skrajnih primerih z virusi ali z uspehom genskega inženiringa, kloniranja in drugih nejasnih stvari. Sedaj je celo težko predstavljati, da se je pred kakšnimi sto in pol leti mikrobiologija pravkar rodila. In v tistih časih jo je zelo zanimala predvsem kvas in bakterije in (ne bodite presenečeni, prosim) velik vpliv na njen razvoj je imel... pivo.
Dolgo sem razmišljal o tem, kako najbolje predstaviti vas, ljudi, ki so zelo neodvisni v svojih sodbah, nekaj koristnih informacij o kvasu in bakterijah? Končno me je zaznal. In trdno sem se odločil dati besedo ljudem, ki so vredni v vseh pogledih - ustvarjalci sodobne mikrobiologije.
Levenguk naj povedo nekaj, mimogrede, pivovarskega sina, ki je dejansko odkril mikrobe s pomočjo mikroskopa, ki ga je izumil. Nadalje lahko veliki Pasteur in njegovi briljantni sodobniki, Balar in Tyndall, posredujejo veliko koristnih stvari. In naj vam gospod Koch pove, kakšni so poševni agari. In končno, skupina briljantnih sodobnih mikrobiologov - avtorjev in urednikov kapitalskega dela "Pivska mikrobiologija", bo lahko na kratko pojasnila, iz katerih bacilov se lahko samo pivo zaščiti in katere bi morale biti resne. Ampak do točke. Obljubim, da bo pogovor s temi izjemnimi gospodi zelo zanimiv. Od sebe nisem dodal niti besede v njihova razsvetljena mnenja. Dovolil sem si, da bi med predstavitvijo podal nekaj nasvetov domačim pivovarjem.
Odkrivanje mikrobov
Leta 1632 se je Antoni Levenguk rodil na Nizozemskem. Ni bil učen človek, niti v smislu svojega časa. Vedel je samo en jezik - nizozemščino, ki so ga govorili trgovci, ribiči in kopači (učeni ljudje so nato uporabljali latinščino). A leeuwenhoek je pomagal. Njegova glava je bila brez vseh nesmisel, nato pa je bila spoštovana zaradi visoke znanosti. In verjel je samo v svoje oči in roke. Antoni Leeuwenhoek je v prostem času od trgovine s tovarno, kot bi rekel zdaj, zgradil in na nepredstavljivo popolnost prinesel mikroskop v kuhinji in na kolenih. In pred njim je odprl svet brez primere. Dvajset let ga je Anthony popolnoma občudoval sam, preden je začel pisati svoja pisma novo ustanovljenemu znanstvenemu angleškemu kraljevskemu društvu.
Leeuwenhoek je bil izjemen človek. Sodnik za sebe, kdo bi si mislil usmeriti mikroskop na kapljico čiste deževnice? Kaj bi lahko odkrili v njej poleg vode same? Leeuwenhok je v tej kapljici našel tisto, kar danes imenujejo mikroorganizmi.
Sl. 1. Moderna fotografija mikroorganizmov v ustih človeka
Zelena barva je Streptococcus (Streptococcus mutans), te bakterije uspevajo pri temperaturi 18 - 40 ° C, absorbirajo saharozo in proizvajajo mlečno kislino. Lila - bakterija Bacteroides gingivalis, lahko povzroči parodontitis, pojavlja se pri 90% zdravih ljudi. Rumena barva - dve veliki celici, stopnja razvoja kvasa glive Candida albican.
Zanimivo je, da se je takoj začel zanimati za vprašanje: od kod bi se lahko pojavile te mikroskopske "male živali"? Mogoče so padli z neba? Od kod prihajajo? In izkušnjo je preživel. Na predalu so postavili čisto oprano porcelansko posodo, da umazanija ne pride v notranjost. Izlil je prvo deževnico, da je umivalnik še bolj čist. In šele potem je vzel padec za raziskave. Bila je čista in prazna. Nič ni bilo. Leeuwenhoek pa tega ni opustil. Dan za dnem se je vrnil v ta vzorec in četrti dan je ugotovil, da se v njem pojavljajo majhne »živali« skupaj z delci prahu in lanenih vlaken.
Opozoriti je treba, da je Leeuwenhoek prvi opazoval celico kvasovk, vendar zaradi svoje nepremičnosti v njem ni prepoznal živega organizma. Kot je neutrudni Nizozemec kmalu ugotovil, so bile majhne "živali", ki so jih odkrili, povsod! Kmalu je Kraljevi družbi povedal, da je v njegovih ustih našel cele grozde teh nevidnih bitij (glej sliko 1). Toda vprašanje rojstva mikroskopskih "živali" je že nekaj časa nejasno. Poleg tega se je zgodilo, da prav zaradi tega na videz sekundarnega pomena mikrobi več let niso pozabili, kar bi se lahko zgodilo z drugačnim preobratom dogodkov.
Številka Sveta 1. Danes obstaja veliko učinkovitejših od raztopin za dezinfekcijo deževnice za čiščenje opreme iz klic. O njih lahko preberete v posebni literaturi. Glavna stvar je razumeti bistvo dolgoročnega opazovanja Leeuwenhoeka s kapljico deževnice. Veliko število spore divjih kvasovk in mikroskopskih gliv, številne bakterije čakajo na krila za delce piva in pivine, ki ste jih prej razlili. Ti mikroorganizmi živijo na sladu, na samih pivovarjih (glej sliko 1) in na mnogih drugih mestih. In lahko skupaj z delci prahu letijo iz kraja v kraj. Moj nasvet je, da uporabite fermentor z žerjavom. Ta preprosta naprava vam bo pomagala, da bo pokrov vašega rezervoarja napolnjen s prihodnjim pivom, vedno zaprt in v skladu s tem, da se izognete neposrednemu stiku z okoliškim zrakom in prahom, ki je poln klic.
Kako mikrobi vstopajo v zaprte posode?
V osemnajstem stoletju je bila zelo priljubljena teorija, ki je trdila, da lahko življenje izvira popolnoma neodvisno, brez očeta in matere (to je drugo življenje). Večina ljudi je mislila, da nekatere živali nimajo staršev in da so otroci odvratnega nereda iz različnih umazanih odpadkov.
Nekateri znanstveniki tistega časa so lahko napisali naslednje: »Spor, da hrošči in ose izvirajo iz iztrebkov krav, je ista stvar kot argument proti razumu, zdravemu razumu in resnični izkušnji.« Ta neumnost je spodbudila najboljše možgane svojega časa k raziskavam, ki so zdaj lahko zelo koristne in poučne za našo temo.
Prvič, "divji" Francesco Redi (Redi) s preprostimi in duhovitimi poskusi je dokazal obstoj staršev v... muhah. Navdihnjen z njegovim delom, je Lazzaro Spallanzani izumil metode za proučevanje razvoja mikrobov. Odvetnik po izobrazbi, duhovnik po poklicu, ta človek je bil v prijateljstvu z Voltaireom in se je popolnoma neodvisno sprijaznil z mikroskopom.
Nasprotnik Spallanzani je bil še en duhovnik po imenu Needham, ki je objavil te rezultate. Takoj, ko je jajcevega omaka vzel neposredno iz ognja, ga je Needham polil v steklenico in tesno zaprl plutovino, da majhne "živali" ali njihova "jajca" niso mogla priti iz zraka. Seveda je ponovno stekel v steklenico. Ta postopek je popolnoma ubil majhne "živali" in njihove "jajca", ki bi lahko še vedno ostala v bučki. Pustil je steklenico stati nekaj dni, nato pa je odprl plutovino in - čudež čudes! - ko je pod mikroskopom preučil vsebino steklenice, se je izkazalo, da je v njem polno mikroba.
Spallanzani je kot razumna oseba seveda razumel, da Needham, najprej, najbrž ni kuhal njegove juhe dovolj dolgo, da bi ubil prisotne mikrobe, in drugič, najverjetneje ni dovolj zamašil plovil. In odločil se je, da bo vse pregledal sam. Spallanzani je delno zapečatil steklenice, da je na gorilniku topil vratove vratov in jih delno preprosto polnil z zamaški. Nekateri (tako zapečateni in zaprti) so kuhali več kot eno uro, drugi pa le nekaj minut. Nekaj dni kasneje je pod mikroskopom skrbno pregledal vsebino steklenic. V buči, zapečateni in previdno kuhani, sploh ni našel ničesar živega. V drugih plovilih je bilo življenje polno, spajkano, vendar kuhano le nekaj minut, v prometne zastoje pa je bilo vključeno v vseh brez izjeme.
Spallanzani je iz svojih izkušenj vzel vsaj dva pomembna zaključka. Prva je, da lahko nekatere bakterije (ali njihova "jajca", kot pravijo zdaj spore) zavrejo nekaj minut in da jih ubijejo, morate zavreti vsaj eno uro. Druga pa je, da bakterije lahko pridejo iz zraka celo v zaprto posodo.
Sl. 2. Tako izgleda kuhinjska goba pod mikroskopom. Gobica ima temno zeleno barvo. Bakterije so obarvane modro, glive, podobne kvasu, so rumene barve, vlaknaste glive pa so rožnate in vijolične barve
Lazzaro Spallanzani je naredil celo vrsto odkritij. Ugotovil je, da lahko mikrobi brez zraka, najprej izolirajo enocelično bitje v kapljici vode in potrdijo hipotezo mikrobne delitve. Ampak, da bi končal spor o izvoru življenja iz nič, ni mogel.
Mikrobiologi iz naslednjega stoletja 19. - Pasteurja, Balarja, Tyndalla so imeli priložnost reči nekaj težjih besed v tem sporu.
Številka Sveta 2. Danes ni znano, kakšne prometne zastoje so uporabili Spallanzani in Needham. Zato je nemogoče natančno določiti, kako je zunanji zrak prišel v bučke in skupaj z njimi nosil mikrobe. Toda mnogi pivovarji vedo, da se pri ostrem ohlajanju, na primer toplotno odporni bučki z bodočim starterjem, v bučki pojavi močan vakuum, ki lahko v notranjosti potegne ne samo zrak, temveč tudi gumijasti zamašek, s katerim je zaprt. Nekateri sodobni avtorji trdijo, da je Needham preprosto uporabljal nesterilne prometne zastoje. Zato bodite zelo pozorni na vaše prometne zastoje. Temeljito jih razkužite. Redno jih spreminjajte. Konec koncev se lahko gumo posuši in razpoči. Ne samo, da bo prenašal zrak in prah, v mikro razpokah plute se lahko kopičijo mnoge bakterije in spore.
Steklenice z zapletenim vratom
Mikrobi v času otroštva Louisa Pasteurja niso nikogar zanimali. Karl Linney, ki je postavil temelje znanstvene klasifikacije živih organizmov, je menil, da so premajhni, da bi bili pomembni.
Pasteur je svojo znanstveno kariero začel kot kemik. Na tem področju je imel srečo, da je izvedel resno odkritje in postal slaven. Ampak let's break malo kronologijo opis njegovega življenja in hitro naprej do obdobja, ko je ta oseba že postala znani mikrobiolog.
Pasteur je bil popolnoma prepričan, da so mikrobi prisotni v zraku. Ne pojavljajo se v njej sami, ampak so prisotni. To njegovo zaupanje je temeljilo na velikem številu poskusov, ki jih je izvajal, kar je trajalo več let. Bučke je napolnil do polovice volumna z mlekom in urinom, kuhal v vodni kopeli, zapečatil vratove in hranil te dragocene posode tri leta. Nato jih je odprl in poskrbel, da zrak v bučki vsebuje enako količino kisika in da mleko ni niti kislo, v bučkah pa ni mikroba. Toda takoj, ko so bile te bučke odprte, so se mikrobi začeli rojevati z roji.
Mnogi znanstveniki v času Pasteurja so verjeli, da so mikrobi spontano rojeni iz zraka, ki je obdarjen s skrivnostno silo, sposobno "ustvariti" življenje. Nasprotniki so Pasteurja obtožili, da je "razkril" zrak s segrevanjem skupaj z raztopino v zaprti posodi. Samo običajni zrak pri sobni temperaturi lahko ustvari življenje, so trdili. To zelo absurdno v sodobnem smislu polemike spet prisiljeni (in za neomejen čas!) Resni raziskovalci, da se na nove izkušnje. Ampak kako narediti, da bi lahko v segreti bučki dobil hladen zrak od zunaj, vendar mikrobi ne morejo priti? Pasteur ni vedel.
Sl. 3. Navadna bučka (A) in balirska balirka (B). Dolga tanka cev krošnja vrat bučke. Med kuhanjem tekočine se cev napolni s paro, ki izhaja iz bučke. Ko se tekočina ohladi, se para kondenzira na stenah in namesto tega zrak vstopi v bučko od zunaj, prašni delci, na katere so vezani mikrobi, ali njihove spore odložijo na vlažne stene cevi in ne pridejo v bučko. Vsebina bučke ostane sterilna.
Težavo je rešil še en izjemen takratni človek - v preteklosti apotekar, Pasteurjev mentor med kemijskimi tečaji, odkritelj kemičnega elementa broma, Antoine Jerome Balard. Morate biti zelo nenavadna oseba, da odkrijete nove kemijske elemente v hrbtnih prostorih lekarne.
Pasteurju je povedal nekaj podobnega: »Z vami vemo, da mikrobi vstopajo v bučke z delci prahu, ki neizogibno vsebujejo zrak. Naredimo tako, da zrak lahko prosto preide v bučko, vendar prah ne more. Za to morate narediti dolge tanke ukrivljene cevi, podobno kot labod vrat. In vse bo v redu. Delci prahu se prilepijo na notranjo površino krivin in ne sodijo v bučke. Dejansko trdni delci prahu ne morejo padati od spodaj navzgor. "
Pasteur se je navdušeno začel pregibati nad plamenom plamenice »labodov vrat«, »svinjskim repom«, različnimi »pletenicami« in številnimi drugimi zapletenimi liki. Vsebina bučk s temi nestandardnimi "prometnimi zastoji" je vedno ostala pregledna in sterilna. Mikroorganizmi ne morejo "padati od spodaj navzgor".
Pasteur je bil odličen demonstrator. Zelo učinkovito je javnosti pokazal svoje bučke z "labodnimi vratovi" in "prašičji repi". Bilo je zelo poučno. Prosojne in sterilne raztopine so začele postajati motne z gostiteljev mikroorganizmov, potem ko je Pasteur elegantno izplaknil ukrivljene cevi in iztekel tekočino nazaj v bučko. Bilo je zelo prepričljivo.
Številka Sveta 3. Ko ohladite sladico v fermentorju nekje v kopalnici ali na drugem mestu, ne pozabite, da bo hkrati zunaj zagotovo prišel zunanji zrak. In lahko vsebuje delce prahu z veliko "lačnih" bakterij, kot tudi spore različnih mikroorganizmov. "Labodov vrat" ne poškoduje vašega fermentorja toliko kot Pasteurjeve bučke. Lahko ga gradite, na primer, iz cev, ki je oprana z alkoholom, ali na natančno dezinfekcijsko upognjeno cevko. Če imate zračni filter (od 0,4 mikronov ali manj), ki ga uporabljate za prezračevanje pivine, namesto "labodov vratu" bo služil tudi odlično. Takšnih naprav v času Pasteurja ni bilo, sicer bi jih uporabil, samo ne pozabite, da filter zagotavlja določeno odpornost na zrak in da lahko "najde" nekakšno razpoko.
Ko izpraznite tekočino iz fermentorja (raztopina za razkuževanje, pranje, pivo), si zapomnite, da prosti prostor takoj zaseda zunanji zrak s prahom in klicami. Poleg tega najpogosteje ta zrak prihaja od zgoraj, prašni delci z bakterijami, ki so se naselili na njih, prosto padejo navzdol v mokro dno fermentorja ali neposredno v pivo. Samo v enem primeru je razmeroma varno - če je bila raztopina za razkuževanje pravkar prisotna. Bakterije, ki padajo v to, preprosto umrejo.
Številka Sveta 4. Enako se zgodi, ko izpraznite steklenico, napolnjeno z raztopino za razkuževanje, ali izpirajte vodo. Zunanji zrak priteče v steklenico. Kaj bo prinesel s seboj? Katere oblike življenja? Da bi se na tej stopnji izognili okužbi, pivovarji pogosto uporabljajo naslednjo tehniko. Temeljito pripravljene steklenice potopimo v šibko raztopino perocetne kisline (0,05%). Nato raztopini damo na poseben nosilec za sušenje steklenic (kjer se nahajajo obrnjena navzdol) in nato pivo, ne da bi steklenico spirali z vodo.
Koliko mikrobov je v zraku?
Od domačih pivovarjev lahko pogosto slišite zelo neresno frazo: dobro, misliš, da bo prišla ena ali druga bakterija, kaj od tega? To nedolžno vprašanje je vprašanje, ali je izjava zelo težko odgovoriti z dvema besedama. To zahteva temeljitejšo razpravo. Naslednjo izjavo mu bomo posvetili.
Pasteur je opravil veliko raziskovanje zraka za mikrobe. Zbiral je vzorce iz najrazličnejših krajev: od kleti lastnega laboratorija do planine Mont Blanc.
Sl. 4. „Divji kvas“ Pichia pastoris. Fotografija je bila posneta s 600-kratnim povečanjem. Ta čudovita žival je zlonamerna škodljivka piva in se nahaja povsod v naravi. Prav tako jim bo všeč vaše pivo. Toda morda vam ne bo všeč njihov okus. Ta enocelična bitja tudi z veseljem uživajo glicerin in metanol, tvorita spore.
Pasteurjevi pomočniki so pripravili na stotine bučk z hranljivo juho. Kuhali so jih (nekaj časa potopljeni v vrelo vodo) in jih takoj zapečatili. Najprej je Pasteur obiskal stare vlažne pariške kleti, kjer je zrak čist in miren. S pomočjo posebnih dolgih žganih klešč, so bili zlomljeni vratovi desetih bučk. Bučke so se obrnile z rahlim piskanjem, da so se povlekli v zrak. Pasteurjevi pomočniki so jih takoj zapečatili s plinskim gorilnikom. Enako delo je bilo opravljeno v dvorišču laboratorija. Po nekaj dneh inkubacije v termostatu se je izkazalo, da je devet od desetih steklenic, odprtih v kleti, popolnoma preglednih in brez klic, in deset od desetih steklenic, odprtih na dvorišču, vrgajo mikroorganizmi.
Druge bučke hranilne juhe so šle v gore. Izkazalo se je, da višji kot je pastor dvignil bučke in čistejši je gorski zrak postal, manjše bučke so postale motne. Pasteur je celo sanjal o vzpenjanju na balon, ki je bil edini takratni zrakoplov, da bi nadaljeval s to študijo. Toda na splošno je bilo vse ali skoraj vse že jasno. Razsvetljena javnost in znanstvena skupnost sta se veselila.
Opozorilna številka 1. Ko vaša sladica ali pivo pride v stik z zrakom v stanovanju ali na ulici, ne pozabite, da lahko tam pridejo nekateri nepovabljeni mikroskopski gostje in s približno 50/50 verjetnostjo, ki lahko vplivajo na okus vaše pijače.
Pivo za seno
Že nekaj časa pa še dolgo nismo spominjali »živahne sile«, ki naj bi ustvarjala spontano generacijo in morda tudi druga živa bitja neposredno iz zraka. Briljantni eksperimenti s Pasteurjem, zlasti pa uničujoč uspeh njegovih javnih govorov, niso pustili ravnodušnih znanstvenikov, ki so podpirali spontano generacijo življenja.
Sl. 5. Seno palice. Njihove spore zlahka prenašajo dolgotrajno vrenje.
Približno z istim setom bučk so ti gospodje odšli v gore. Tam, ob nevarnosti padca v brezno, se je ekspedicija povzpela še višje, kot se je povzpel Pasteur. Z vsemi varnostnimi ukrepi so bili odvzeti vzorci zraka. V tej študiji smo uporabili le namesto kvasovke, ki jo je Pasteur uporabljal kot hranilno gojišče.
In znanstveni nasprotniki Pasteurja so dosegli, kar so želeli. V njihovih steklenicah so kmalu odkrili veliko količino bakterij! Kaj se je začelo tukaj. Razprave so se hitro premaknile iz povsem znanstvene ravni v identiteto nasprotnikov. Zdelo se je, da znanstveniki posmehujejo resnico. Kaj je najbolj zanimivo - obe strani sta imeli prav. Da bi to razumel, je potreboval hladen britanski genij Tyndalla (John Tyndall).
John Tyndall je angleški fizik. Poleg tega je zgradil železnice in bil geodet. Kot fizik se je ukvarjal z različnimi optičnimi pojavi, vključno z izvajanjem briljantnih poskusov, ki so razlagali modro barvo neba. Plezalec in raziskovalec ledenika, Tyndall je ostal v zgodovini znanosti eden od avtorjev teorije velikih ledenikov, ki so v antiki pokrivali polovico celine. Kaj je storil v svojem življenju! In tudi mikrobiologija.
Kako je Tyndall izumil svojo metodo sterilizacije, ni natančno znano. Morda se je spomnil Spallanzanijeve raziskave, ki je bila prva, ki je pokazala, da kratkoročno ogrevanje ne more uničiti vseh klic. Mogoče je šel na drug način. Zdaj je znanost zagotovo ugotovila, da mnoge bakterijske spore umrejo le, ko se segrejejo v vlažnem okolju do 120 ° C. Na primer, spore sena bacillus, zelo razširjena v naravi, zlahka prenašajo dolgotrajno vrenje. Če uporabljate "suho toploto", lahko nekateri mikrobi prenesejo visoke temperature. Med Tyndalovim časom seveda nihče ni vedel. On je bil prvi, ki je lahko pokazal, da bakterije v sesanju, ki so jih uporabljali nesrečni raziskovalci, niso nastale zaradi »sile proizvodnje« čistega gorskega zraka, ampak iz sena.
Številka Sveta 5. Tyndalova metoda (tindalizacija) je lahko zelo uporabna za domače pivovarje, zlasti pri pridobivanju čiste kulture kvasovk, kadar je sterilnost še posebej pomembna (drugače, v petrijevkah namesto kvasa lahko plesen zraste). Njegovo bistvo je v tem, da se hranilni medij, kot je pivina, večkrat zavre (100 stopinj). Lahko se segreje v vodni kopeli - bučko z mošto damo v lonček z vodo. Po vsakem ogrevanju sledi hlajenje in staranje za en dan (hkrati je treba upoštevati pogoje sterilnosti - uporabiti cevi v obliki "labodjih vratov" ali filtrov). Ko se pivina ohladi, se spore, ki se lahko razvijejo v njej, kalijo. Drugi vrelišče jih bo ubilo. Da bi bili zvesti, vre še tretjič.
Kvas in bakterije
Vprašaš, zakaj vse te trike? Kaj smo tako ganged na mikrobe? Kaj so nevarne za domače pivo? Dobro vprašanje Ponovno je čas, da »dajemo besedo« Pasteurju, ker je bila ta oseba prva med ljudmi, ki je lahko ugotovila, kaj se dogaja.
Medtem ko je mladi kemik Louis Pasteur delal na kristalih vinske kisline, se je zgodilo nekaj dogodkov. Še en Francoz, Kanyar de la Tour, je leta 1837 izvlekel kapljico pene iz rezervoarja za pivo in odkril pod mikroskopom, da drobne kroglice kvasovk (ki so jih pred njim videli Leuvenguk) sproščajo procese, ki se spremenijo v točno iste kroglice in vse se ponovi. Nadalje je podal zelo pogumno domnevo, da so te kroglice izdelovale pivo iz slada in hmelja (same po sebi niti slad niti hmelj niso postale pivo).
Istočasno je dr. Schwann v Nemčiji najprej opozoril na majhne "živali" (bakterije) kot krivce za kvarjenje hrane. Napisal je: »Kuhajte dobro meso, ga položite v čisto steklenico in pustite, da zrak skozi rdeče cevi preide skozi to meso - meso bo ostalo nekaj mesecev popolnoma sveže. Toda dan ali dva po tem, ko odstranite te cevi in pustimo v običajnem zraku, ki vsebuje majhne "živali", meso začne oddajati odvraten vonj; v njem se pojavijo cele grozde drobnih gobavih bitij. Zato ni dvoma, da se te živali razgradijo in pokvari meso. "
Iz nekaterih razlogov ti pionirski deli niso naredili pravega vtisa na sodobnike, celo na strokovnjake. Zdelo se je, da je svet želel samo počakati, da Pasteur konča z kristali in se končno ukvarja z mikrobi. Kmalu se je to zgodilo v mestu Lila, kjer je bil Pasteur imenovan za dekana in profesor na lokalni izobraževalni ustanovi.
Nekega dne je poslovnež pozval Pasteurja k njegovi destilarni in ga prosil, naj mu pomaga pri reševanju nekega industrijskega problema. Sin tega človeka je bil študent Pasteurja.
Na kratko, težava je bila, da nekateri rezervoarji za fermentacijo sploh niso proizvedli alkohola iz sladke pese. Kaj bi se lahko tam zgodilo? Zdaj je koncept "fermentacije", katerega posledica je pretvorba sladkorja v alkohol, edinstveno povezana s pojmom "kvas". Toda že tisočletja je človeštvo uživalo pivo, vino in nato ekstrahiralo alkohol iz sladkorne pese, ne da bi imelo kaj takega.
Sl. 6. Pivski kvas (Saccharomyces cerevisiae) t
Omeniti je treba, da Pasteur ni začel študija s študijem kvasovk (navsezadnje je bilo v tistih rezervoarjih, kjer so bili prisotni, vse v redu). Začel je z mikroorganizmom škodljivcev in kmalu ugotovil, da te majhne (večkrat tanjše od kvasa) palice proizvajajo večjo količino mlečne kisline. In zato nikoli ne proizvajajte alkohola.
Šele po tem se je Pasteur odločil za krivce za pojav alkohola. Potrebno je bilo opraviti veliko eksperimentalnega dela, da bi dokazali vpletenost kvasovke v fermentacijo in njen končni rezultat, alkohol. Ker mnogi znanstveniki tega časa niso mislili tako.
"Kvasovih" Pasteurjevih znanstvenih nasprotnikov je delno pomagal tudi sam kvas. Kot je zdaj dobro znano, se lahko rast kvasovk pojavlja v zelo enostavnem kompozicijskem mediju. Poleg fermentacijskih sladkorjev potrebujejo le vir dušika, na primer amonij (rastoče celice, seveda, potrebujejo nekaj drugega, vendar Pasteur še ni vedel za to). To je vloga amonija v življenju kvasovk in Pasteur eksperimentalno. Ugotovil je, da amonijeva sol hitro izgine iz raztopine in kvas razmnožuje. V tistih dneh je veljalo, da se pretvorba sladkorjev v alkohol zgodi s kemičnimi sredstvi s pomočjo nekaterih beljakovin. In tukaj ste, brez beljakovin, razen aktivno plemenskih kvasovk. Kar je bilo potrebno dokazati.
Izkazalo se je, da morje vina in oceana piva sploh niso proizvajali ljudje, ampak enocelična bitja - kvas. Ljudje so jim pri tem pomagali. Pasteur je imel tudi zelo resen sum, kmalu prerasel v prepričanje, da lahko nekateri še manjši mikroorganizmi preprečijo, da bi kvas naredil to ogromno in koristno delo.
Po mnenju sodobnih strokovnjakov Henny J. Van Vuuren in Fergus G. Priest, prisotnost tujih mikroorganizmov “na različnih stopnjah proizvodnje piva ali v že dokončani proizvod vpliva na koncentracijo nekaterih hlapnih snovi, ki je včasih odvisna od stopnje okužbe. Kompleksno in občutljivo ravnotežje aromatičnih spojin določa okus, aromo in kakovost piva. Da bi zagotovili nespremenljivost okusa in vonja piva, je treba prisotnost (tujih mikroorganizmov) izključiti v pivovarski industriji... Posebno pozornost je treba nameniti zagotavljanju pravilnega čiščenja in dezinfekcije prostorov in opreme. "
Vse to pa je postalo znano šele po rojstvu Pasteurjevega članka »Študija piva, njegovih bolezni in njihovih vzrokov. Načini ohranjanja kakovosti piva in nove teorije fermentacije. " (Kdor bere v francoščini, lahko ta dela bere na http://gallica.bnf.fr/ark:/12148/bpt6k73599).
Pasteurjev članek je bil rezultat njegovih številnih potovanj v pivovarne v Franciji in Angliji, rezultat mikroskopskega pregleda vsebine več sto fermentacijskih rezervoarjev in končno celo zgradb v laboratoriju majhne pivovarne. Pasteurja so poganjala tudi domoljubna čustva. Želel je narediti francosko pivo najboljše na svetu, bolje kot nemško in angleško.
Sl. 7. Tako je Pasteur upodobil mikroorganizme, ki jih je opazil v pivu. Veliki ovali - kvas; podolgovate in kratke palice - bakterije, vzrok poškodbe
Toda Pasteur, kot vsak Francoz, je bilo vino očitno bližje in bolj domačo kot pivo. S mikroskopom je začel raziskovati okvare okusa. Pasteur je želel predstaviti svoje izkušnje širši javnosti. Potem ko je na izviren način preučeval veliko število različnih bolnih vin, se je odločil, da bo s svojimi rojaki - vinarji iz mesta Arbois - zares pokazal. Vse je povabil, naj prinesejo pokvarjeno vino in obljubil, da bo napako razkril, ne da bi poskusil vino. Vinarji so se odločili, da bodo poklicali profesorja in skupaj z bolnim vinom prinesli popolnoma zdravo. Pasteur je v mikroskopu pregledal kapljico in navedel, da mora imeti to vino normalen okus. Nato je pred očmi popolnoma omamljenih vinarjev nedvoumno poudaril grenko, mastno in viskozno vino. Tako se je rodila moderna mikrobiologija.
Celoten članek je objavljen v Pro različici strani. Tu se lahko naročite.
http://alexandrebrew.com/2009/04/12/%D0%BE%D1%81%D0%BD%D0%BE%D0%B2%D1%8B-%D0%B0%D1%81%D0% B5% D0% BF% D1% 82% D0% B8% D0% BA% D0% B8-% D0% B0% D0% BD% D1% 82% D0% B8% D1% 81% D0% B5% D0% BF % D1% 82% D0% B8% D0% BA% D0% B8-% D0% B4% D0% BB% D1% 8F-% D0% B4% D0% BE% D0% BC% D0% B0 /